医疗检测

医用敷料作为直接接触人体组织的医疗器械，其细胞毒性是生物相容性评价的核心指标，而浸提液制备是细胞毒性测试的关键前处理环节——它通过模拟临床场景提取敷料中的潜在毒性成分，直接决定测试结果的准确性。第三方检测机构需严格遵循国际国内标准，规范浸提液制备流程，确保数据科学可靠。

浸提液制备的核心原则

浸提液制备需围绕“模拟临床、有效提取、无额外干扰”三大原则展开。首先是模拟临床场景，如皮肤覆盖类敷料采用37℃、24小时浸提，匹配人体体温下的短期接触；其次是有效提取，需通过参数调整让敷料中的可溶出成分（如残留单体、防腐剂）充分转移至介质；最后是无干扰，所有容器需灭菌，介质需无热原，避免引入新毒性。

ISO 10993-5与GB/T 16886.5均强调，浸提液需“代表样品临床使用中的可溶出成分”。例如MTT法测试时，介质需兼容细胞生长，不能用高浓度乙醇等有毒溶剂，确保结果不受介质本身影响。

浸提介质的选择标准

浸提介质需“溶解目标成分且不影响细胞活性”，常见类型及适用场景如下：无血清培养液（如DMEM）适用于水性敷料（海藻酸盐、水胶体），成分明确且无血清干扰；生理盐水适用于水溶性小分子成分（如交联剂残留），模拟破损皮肤接触场景；含血清培养液（10%胎牛血清DMEM）适用于油性敷料（凡士林纱布、硅酮），血清脂蛋白可溶解脂溶性成分。

介质需做空白对照试验：将介质加入细胞培养体系，观察细胞存活率，确保介质无毒性。若样品为疏水性材料，需验证介质对成分的溶解性，避免因溶解不足导致结果假阴性。

样品前处理的规范操作

前处理目的是增大接触面积，确保浸提充分。不同形态样品处理方式不同：片状/膜状敷料剪成1cm×1cm小块，避免锋利边缘划伤容器；凝胶状敷料用无菌玻璃棒搅拌成混悬液，分散结构；多孔敷料挤压去除内部空气，避免空气占据介质空间；粉末状敷料直接称量加入介质。

操作需无菌：工具经高压灭菌，超净工作台内进行，避免微生物污染。已灭菌样品保留原包装灭菌标识，未灭菌样品需先消毒（如紫外线照射30分钟），但需验证消毒不改变样品化学组成（如乙醇不溶解高分子材料）。

浸提条件的确定与控制

浸提条件包括温度、时间、振荡方式与比例，ISO 10993-5默认参数：37℃±1℃（人体体温）、24小时±2小时（短期接触）、100-200rPm振荡（促进溶出）。若临床使用时间更长（＞7天），可延长至7天；温度需匹配实际场景，如烧伤敷料可适当调高，但需在报告说明。

振荡方式依样品调整：片状用水平振荡避免堆积，凝胶状用垂直振荡促进分散。浸提比例选质量体积比（1g:10ml）或表面积体积比（1cm²:1ml）——固体片状优先表面积比（反映实际接触），粉末/凝胶优先质量比（表面积难测）。

浸提液制备的具体流程

标准化流程确保可重复性：

1、样品准备：前处理后称量/测表面积；

2、介质准备：预热至37℃的无菌介质；

3、构建体系：样品加介质，密封标记编号、比例、日期；

4、浸提：恒温振荡器37℃、150rPm、24小时；

5、分离：离心（1000rPm，10分钟）或0.22μm滤膜过滤；

6、分装：上清液分至无菌管，标记信息；

7、质检：微生物涂片镜检、PH测试（需7.2-7.4，符合细胞生长）。

细节需注意：密封用透气膜防压力过高，离心平衡样品，过滤选低吸附滤膜（如PES）避免成分流失。

浸提液浓度的标准化方法

浓度标准化确保结果可比，常见表示：质量浓度（mg/ml，每ml介质含样品质量）、表面积浓度（cm²/ml，每ml介质含样品表面积）。如1g样品加10ml介质，质量浓度0.1g/ml；

10cm²样品加10ml介质，表面积浓度1cm²/ml。

计算需准确：质量比用电子天平（精确0.01g），表面积比用游标卡尺测长、宽（忽略厚度）。多孔样品用表观表面积，需在报告说明。浓度验证用蒸发残留法：1ml浸提液蒸发干燥，测残留质量，误差需＜±5%。

浸提液的保存与稳定性

浸提液需尽快使用（24小时内），若保存：4℃下不超过72小时，-20℃下不超过1个月。-20℃保存需缓慢解冻，避免反复冻融破坏成分（如蛋白质变性）。

保存需密封防污染，若出现浑浊、沉淀则丢弃。易降解成分（如维生素）需现用现制，第三方机构需依样品特性制定保存方案，并在报告说明有效期。

常见问题与质控要点

常见问题及解决：微生物污染（无菌操作不严）——加强无菌，介质做无菌检查；浸提不充分（样品过大）——切更小块（0.5cm×0.5cm）、延长时间至48小时；介质干扰（含抗生素）——选无抗介质，做空白对照；滤膜吸附（硝酸纤维素膜）——用PES膜，验证吸附率（HPLC测滤前后浓度）。

质控要点：每批做空白对照（介质毒性）、阳性对照（0.1% Triton X-100，验证体系敏感性）、回收率试验（加标回收＞80%）；定期校准设备（振荡器温度、离心机转速）；记录所有参数，确保可追溯。