环境检测

农田地下水是农业灌溉与畜禽饮用的重要水源，其微生物指标直接关系农产品安全与生态健康。第三方检测机构需通过标准化方法确保结果准确，本文围绕农田地下水微生物检测全流程，拆解从采样到结果的关键操作要点。

样品采集：无菌操作与代表性并重

采样前需准备经121℃高压灭菌30分钟的无菌容器（聚乙烯瓶）、手套、酒精棉片。采样点根据农田范围、水井分布及污染风险点（如养殖场周边）布设，每块农田至少3个点保证代表性。

采样时先排尽井中停滞水5-10分钟，待水流稳定后，用无菌容器接取中层水（水面下0.5-1米），避免容器接触污染物，采集250-500毫升后密封，标注采样时间、地点、编号。

样品运输与保存：严控温度防微生物变化

样品需4℃以下冷藏运输（保温箱加冰袋），24小时内送检；若无法及时送检，6小时内放4℃冰箱，保存不超48小时。粪大肠菌群样品需2小时内送检，避免温度影响微生物数量。

运输中避免震荡，到实验室后核对样品信息，确认无泄漏污染后转4℃冰箱，记录接收时间。

样品前处理：均质稀释保障检测准确

浑浊样品需均质：取25毫升样品加225毫升无菌生理盐水，用无菌均质器8000-10000转/分钟处理1-2分钟，制成1:10稀释液；微生物多的样品需系列稀释（如1:100），选3个连续稀释度做平行样。

操作中需无菌，均质器用75%酒精消毒，移液器枪头一次性使用，避免交叉污染。

菌落总数检测：平板计数法标准化操作

按GB 4789.2-2016，取1毫升稀释液注入平皿，倒入46℃营养琼脂培养基混匀，凝固后倒置36±1℃培养48小时。

培养后选菌落数30-300的平皿计数，平均值乘稀释倍数得菌落总数（CFU/mL）；若菌落数超范围，需重新稀释检测。

总大肠菌群检测：多管发酵或滤膜法

按GB 4789.3-2016多管发酵法：取10、1、0.1毫升稀释液分别接入双料/单料乳糖胆盐发酵管，36℃培养24小时，观察产气（倒管气泡）产酸（培养基变黄）。

阳性管转种伊红美蓝琼脂平板，36℃培养18-24小时，挑取紫黑色带金属光泽菌落，革兰氏染色确认阴性无芽孢杆菌后，查MPN表得总大肠菌群数（MPN/100mL）。

清澈样品可用滤膜法：样品过0.45μm滤膜，贴远藤氏琼脂平板36℃培养24小时，计数红色带金属光泽菌落。

粪大肠菌群检测：高温筛选粪便污染

按GB 4789.3-2016，将总大肠菌群阳性管转种EC肉汤管，44.5℃水浴培养24小时，产气即为阳性。

滤膜法需将滤膜贴MC琼脂平板，44.5℃培养24小时，计数蓝色/蓝绿色菌落得粪大肠菌群数，直接反映粪便污染程度。

致病菌检测：目标菌分离与鉴定

沙门氏菌按GB 4789.4-2016：样品加缓冲蛋白胨水36℃预增菌8-18小时，转四硫磺酸钠煌绿增菌液42℃增菌，再转SS/HE琼脂平板，挑取典型菌落（SS平板无色或中心黑）做生化（三糖铁）和血清学鉴定。

志贺氏菌按GB 4789.5-2016：样品加革兰氏阴性菌增菌液36℃增菌6-8小时，转麦康凯/HE琼脂平板，挑取无色菌落做生化（葡萄糖发酵、动力试验）和血清学鉴定；检测需设阳性（标准菌）、阴性（无菌水）对照。

质量控制：全程保障结果可靠

每批样品需设空白（无菌水）、阳性（标准菌）、平行样对照：空白无生长，阳性有典型反应，平行样相对偏差≤10%，否则重测。

实验室需参加能力验证、盲样考核等外部质控，检测人员需培训合格上岗，操作过程记录试剂批号、培养条件等，确保可追溯。