生物检测

抗体偶联药物（ADC）作为精准抗癌的“生物导弹”，其蛋白质组分的完整性与异质性直接影响疗效与安全性。蛋白质分离鉴定是ADC质量控制的核心环节，而三方检测机构需遵循严格的合规流程，确保结果的可靠性与法规符合性。本文围绕ADC蛋白质分离鉴定的三方检测全流程，拆解关键合规要点，为行业提供实操指南。

检测前的需求确认与资质匹配

三方检测的第一步、明确委托方需求与法规边界。委托方需提供ADC的基本信息（如抗体靶点、连接子类型、payload结构）、蛋白质分离鉴定的具体指标（如聚集体含量、电荷变异体比例、分子量准确性），以及目标法规要求（如符合NMPA《抗体偶联药物非临床研究技术指导原则》或FDA《Antibody-Drug Conjugates》指南）。

检测机构需验证自身资质与项目的匹配性：一是具备CNAS或CMA认证的生物制品检测能力，覆盖ADC蛋白质分离鉴定的关键技术（如色谱、质谱、电泳）；二是内部SOP需与法规要求一致，例如关于SEC检测聚集体的系统适用性标准，需符合ICH Q2(R1)的色谱方法验证要求。

此外，双方需签订书面协议，明确责任划分：委托方负责提供真实、完整的样品信息与参考标准品；检测机构负责遵循合规流程实施检测，确保结果可追溯。

样品接收与前处理的合规控制

样品是检测的基础，其完整性直接影响结果可靠性。三方机构需建立严格的样品接收流程：首先核对样品标识（如唯一编号、批次、生产日期），确保与委托方提供的信息一致；其次检查样品状态（如是否密封、有无破损、存储条件是否符合要求——ADC通常需-20℃冷冻存储，若运输中温度超限，需立即通知委托方并启动偏差处理）；最后确认样品数量（需满足检测需求，通常需预留复检测量）。

样品前处理需遵循标准化SOP：例如，SEC检测聚集体时，样品需用流动相稀释至合适浓度（如1-2 mg/mL），避免浓度过高导致柱超载；CE-SDS检测分子量时，需加入还原剂（如DTT）破坏二硫键，还原剂的浓度（如50 mM）与孵育时间（如37℃孵育30分钟）需严格控制，确保结果重复性。

前处理过程需记录关键参数：如稀释倍数、孵育温度与时间、操作员姓名，所有记录需及时录入电子系统（符合21 CFR Part 11的电子记录要求），确保可追溯。

分离方法的选择与验证合规性

ADC蛋白质的分离需根据目标属性选择合适方法，且每种方法需经过验证，确保其适用于检测目的。常用分离方法包括：尺寸排阻色谱（SEC）用于分析聚集体与单体比例，离子交换色谱（IEC）用于分离电荷变异体（如酸性峰、碱性峰），疏水相互作用色谱（HIC）用于区分疏水性差异组分，CE-SDS用于测定分子量与纯度。

分离方法的验证需覆盖关键参数：以SEC为例，需验证柱效（理论塔板数≥5000）、分离度（单体与聚集体峰的分离度≥1.5）、重复性（同一样品连续进样的峰面积RSD≤2.0%），这些参数需符合ICH Q2(R1)的要求；以IEC为例，需验证pH范围（需覆盖目标蛋白的等电点，如抗体的等电点约为8.0，IEC流动相的pH可设为7.0）与缓冲液浓度（如20 mM Tris-HCl），确保电荷变异体的有效分离。

此外，方法需定期复核：例如，色谱柱使用100次后，需重新验证柱效与分离度，若不符合要求则更换色谱柱，避免因柱性能下降导致结果偏差。

鉴定技术的法规符合性应用

蛋白质鉴定是确认ADC结构完整性的关键，常用技术包括LC-MS/MS序列确认、MALDI-TOF分子量精确测定、肽图分析，其应用需符合法规要求：

LC-MS/MS序列确认时，需使用胰蛋白酶对抗体部分酶解，酶的活性需验证（如肽段覆盖率≥95%），酶解条件（pH 8.0、37℃孵育16小时）需与验证时一致；肽段分离需使用反相C18柱，流动相为HPLC级（如0.1%甲酸水溶液与0.1%甲酸乙腈溶液），确保无杂质干扰。

MALDI-TOF测定分子量时，需用校准品（如牛血清白蛋白，分子量66430 Da）校准仪器，校准后质量误差需≤50 ppm，符合ICH Q6B要求；样品需与基质（如CHCA）充分混合，避免晶体不均一影响信号。

肽图分析需与参考标准品比对，确保关键肽段（如含连接子修饰的肽段）一致，若出现新增或缺失肽段，需调查原因（如抗体序列突变、酶解不完全）。

数据处理与溯源的合规要求

数据处理需确保准确性与可追溯性：首先，软件需符合21 CFR Part 11要求（如Empower或OpenLAB），具备用户权限管理与审计追踪功能（记录数据修改时间与原因）；其次，数据处理需遵循标准化流程，例如SEC峰面积积分用自动功能，若手动调整需记录原因；CE-SDS分子量计算用相关性系数≥0.99的标准曲线，确保准确性。

所有数据需与原始记录关联：每个结果需链接到对应的仪器谱图、进样记录、前处理参数，形成完整溯源链，监管核查时可快速调出相关记录。

中间控制与偏差管理的实操要点

中间控制需在每批检测前进行系统适用性试验：例如，SEC检测前进样对照品，验证分离度、拖尾因子、重复性符合要求；CE-SDS检测前进样Marker，验证电泳分辨率（如10 kDa与15 kDa蛋白分离度≥1.0）。若系统适用性失败，需停止检测并调查原因（如色谱柱污染、缓冲液过期）。

偏差管理遵循“发现-记录-调查-纠正”流程：例如，某样品聚集体含量超标准（≥5%，设定标准≤2%），需先确认样品处理是否错误，再复检测，若复检仍异常，需通知委托方并提供调查报告，说明偏差原因与影响。

中间控制记录与偏差报告需归档，作为合规证据。

报告出具与归档的合规规范

检测报告需符合法规与委托方需求，内容包括：委托方信息、样品信息、检测方法（引用法规或SOP编号）、检测结果（如聚集体含量1.2%、酸性峰占比15%）、结果判定（是否符合标准）、授权签字人签名（中级以上职称）、报告日期。

报告需加盖CMA/CNAS标志或公章，电子报告需加密（如PDF加密）防止篡改。

归档需保存所有记录：委托协议、样品接收记录、前处理记录、仪器谱图、数据处理记录、中间控制记录、偏差报告、检测报告。保存期限符合法规要求（如NMPA要求保存至药品有效期后1年，无有效期则保存5年）；电子记录备份至安全服务器，纸质记录存放在防潮防火档案室。