医疗检测

OECD 404是国际通行的皮肤刺激测试标准方法，用于评估化学物质、化妆品、日化产品等对兔皮肤的刺激性。在第三方检测中，样品前处理是连接委托方与测试环节的关键步骤——不规范的处理可能导致样品成分不均、活性损失或干扰测试，直接影响结果的准确性与可比性。本文基于OECD 404准则与实验室实践，梳理第三方检测中样品前处理的具体规范，覆盖接收、分类、制备、保存全流程，为检测机构提供可操作的参考依据。

样品接收与标识规范

第三方检测机构收到样品后，首先需核对委托方提供的完整信息：样品名称、批号、生产/制备日期、数量、状态（如“未开封”“冷藏”）及安全数据单（SDS）。同时检查样品包装是否完好，若存在破损、泄漏、发霉或异味等异常，需立即拍照记录并联系委托方确认处理方案（如重新提供样品或继续测试）。

为确保样品可追溯，需为每个样品分配唯一标识：通常由“机构简称+年份+流水号”组成（如“XXLab-2024-056”），并标注接收日期、检测项目（“OECD 404皮肤刺激测试”）。标识需贴在样品容器外侧显眼位置，且一式两份——一份随样品流转至实验环节，一份存入检测档案。

对于多批次或同名称不同批号的样品，需单独标识并分区存放（如用不同颜色的储物盒区分），避免混淆。接收环节的所有信息需同步录入实验室信息管理系统（LIMS），形成电子记录，确保纸质与电子记录一致。

委托方提供的“样品说明书”需一并归档，便于处理时参考样品的理化性质（如溶解性、挥发性），减少误操作风险。

物理性状评估与分类方法

样品前处理的第一步、“性状定性”：通过目视观察、触觉感知（如液体粘度、固体硬度）和嗅觉判断，记录样品的状态（固体/液体/半固体）、颜色（如“乳白色”“浅棕色”）、气味（如“无异味”“柑橘香”）及特殊性状（如“分层”“结块”）。

根据性状分类后，需对应不同的处理策略：粉末状固体需过筛去除大颗粒，浑浊液体需均质化处理，半固体膏霜需搅拌至均匀。例如，“可溶性固体”（如氯化钠）可直接溶解于水，“不溶性固体”（如滑石粉）需制成混悬液；“澄清液体”需离心去沉淀，“浑浊液体”需搅拌均质。

若样品性状与委托方描述不一致（如委托方称“液体”但实际为半固体），需立即联系委托方确认——性状误判会导致处理方法错误，进而影响测试结果。例如，将半固体误作液体稀释，会导致样品浓度偏低，低估刺激性。

物理性状评估需形成书面记录，作为后续处理的“操作依据”，避免主观判断的偏差。

溶解性与分散性处理要求

OECD 404测试中，样品需以“与皮肤接触的实际状态”或“载体稀释状态”施加于兔皮，载体通常选择水（极性）或橄榄油（非极性）——这两种载体无皮肤刺激性，符合标准要求。因此，需先测试样品在两种载体中的溶解性：

对于水溶性样品（如爽肤水），按委托方要求的浓度（或标准浓度50%w/v）用去离子水稀释，搅拌至完全溶解；对于橄榄油可溶性样品（如精油），用精制橄榄油稀释，确保无沉淀。若样品在两种载体中均不溶（如某些矿物粉），需使用0.5%吐温80水溶液（乳化剂）制备混悬液——乳化剂需提前做空白对照，确认无刺激性。

分散性处理需确保样品均匀：混悬液需用磁力搅拌器搅拌10分钟，或超声处理5分钟（避免温度升高），直至无明显颗粒沉淀。处理后需立即使用，避免放置过久导致分层——分层会导致样品浓度不均，影响测试重复性。

挥发性物质的特殊处理

挥发性样品（如乙醇、丙酮、挥发性精油）的核心风险是“成分损失”——处理过程中挥发会导致样品浓度降低，影响实际接触量。因此，接收后需立即转移至带塞玻璃瓶（密闭容器），并在低温（4℃）环境下短暂存放。

处理过程需“快速高效”：液体样品的稀释需在密闭烧杯中进行，搅拌时间控制在2分钟内；固体样品的研磨需在带盖研钵中操作，避免暴露于空气中。测试时，需使用“封闭斑贴”（如用塑料膜覆盖样品，边缘用胶带固定），防止样品挥发。

对于挥发性极强的样品（如乙醚），需在通风橱内完成所有操作：快速称取样品、稀释、施加于兔皮，减少暴露时间。处理过程需记录“环境温度”“处理时间”“密闭情况”，便于后期追溯结果的合理性——例如，若样品挥发严重，需在报告中注明“可能因挥发导致刺激性低估”。

固体样品的制备规范

粉末状固体需先过筛：使用100目标准筛（孔径约0.15mm），去除大颗粒或杂质——大颗粒会刮伤兔皮肤，导致假阳性结果。过筛后的粉末需收集于干净容器中，搅拌均匀。

颗粒状固体（如小药片）需研磨成细粉：用研钵研磨5-10分钟，避免摩擦生热导致样品成分变化（如热敏性成分分解）。研磨后的粉末需过筛，确保颗粒大小一致。

不溶性固体（如滑石粉）需制备成混悬液：按10%w/v的比例加入载体（水或橄榄油），搅拌至均匀。混悬液的浓度需严格按委托方要求，若委托方未指定，采用OECD 404推荐的“最高使用浓度”（如未稀释的原样品，或10%w/v混悬液）。

块状固体（如肥皂）需先切成薄片（厚度约2mm），再研磨成粉末——避免样品接触手上的油脂，需戴一次性手套操作。

液体样品的均质化处理

澄清液体需离心去沉淀：使用离心机以3000rPm转速离心10分钟，去除底部的灰尘或不溶性杂质，取上清液用于测试——沉淀会影响样品浓度，导致结果偏差。

浑浊液体（如乳液）需均质化：用磁力搅拌器搅拌5分钟，或用均质机（2000rPm）处理3分钟，确保水相、油相均匀混合，无分层现象。若液体存在分层（如化妆水与油分离），需摇匀后立即处理：摇匀1分钟，30分钟内施加于兔皮，避免再次分层。

高粘度液体（如卸妆油）需稀释：按1:1比例加入橄榄油，搅拌至流动性适中。稀释比例需记录在原始记录中——例如，“样品+橄榄油=1:1”，确保结果可追溯。

半固体样品的均质与稀释

膏霜、凝胶类半固体需先均质化：用玻璃棒或均质机（1500rPm）搅拌5-10分钟，确保质地均匀，无颗粒或结块。例如，面霜需搅拌至“细腻无颗粒”状态——颗粒会刮伤皮肤，结块会导致接触面积不均。

若半固体粘度太高（如凡士林），需用精制凡士林或橄榄油稀释：稀释比例需经委托方确认（如2:1），稀释后需再次均质。稀释剂需提前做空白测试，确认无刺激性——例如，用橄榄油稀释凡士林，需测试“纯橄榄油”的刺激性，确保结果无干扰。

凝胶类样品（如芦荟胶）需检查触变性：搅拌后粘度降低，需现用现配——放置过久会导致粘度恢复，施加时难以均匀涂抹。

干扰物质的排除与验证

样品中若含干扰物质（如防腐剂、香料、色素），需评估其对测试结果的影响：例如，样品含0.1%苯扎氯铵（防腐剂，轻微刺激性），需确认委托方是否要求去除，或在报告中注明“样品含防腐剂，可能影响结果”。

若干扰物质需去除，需采用合适方法：水溶性防腐剂用透析法去除（样品装入透析袋，浸泡于去离子水），挥发性香料用蒸馏法去除（低温蒸馏，收集样品液）。去除后需测试“残留浓度”——确保干扰物质浓度低于“无影响阈值”（如<0.01%）。

若干扰物质无法去除，需做“干扰对照测试”：同时测试“样品+干扰物质”与“干扰物质空白”，比较两者的刺激性分数。例如，样品含香料，需测试“样品”“香料空白”“水空白”，判断香料是否影响样品的真实刺激性。

样品稳定性验证与保存

处理后的样品需验证稳定性：室温（25℃）放置24小时，观察性状变化（如分层、沉淀、颜色变化）。若无明显变化，可用于测试；若有变化（如混悬液沉淀），需现用现配——现配的样品需在1小时内使用，避免稳定性下降。

未处理的原始样品需按委托方要求保存：冷藏样品（如生鲜提取物）放入4℃冰箱，冷冻样品（如生物制品）放入-20℃ freezer，并用密封袋包裹防止受潮。保存需记录“温度”“时间”“状态变化”——例如，“样品于4℃保存7天，无发霉”。

样品保存期限需符合实验室规定：测试完成后保存3个月，超过期限的样品按 hazardous waste 处理（如分类收集、委托有资质的公司处置）。保存期满后，需记录“处置日期”“处置方式”，确保追溯性。