医疗检测

在三方检测机构的皮肤致敏性测试中，样品前处理是连接待测样品与实验系统的核心环节，直接影响结果的准确性与可比性。不合理处理可能导致成分损失、分散不均或干扰物质引入，因此标准化流程是保障测试可靠性的关键。

样品接收与初步核查

收到样品后，首先核对标签与委托协议的名称、批号、规格等信息，确保一致；无标签或信息模糊需联系委托方补充，避免错样。

检查样品外观：是否破损、泄漏、变色或结块，如液体分层需记录并评估影响；审核委托方提供的样品组成说明，了解成分与溶剂类型。

确认存储要求：易挥发样品密封冷藏，生物源性样品-20℃冷冻，保持样品初始状态。

完成接收记录，包括样品状态、存储条件与委托方反馈，确保可追溯。

样品分类与均质化处理

按形态分为固体、液体、半固体：固体用玛瑙研钵研磨至≤100目细粉，热敏性样品需低温研磨；液体用磁力搅拌器（200-300rPm）搅拌10分钟，乳浊液用高速均质机（10000rPm）处理2分钟。

半固体如膏霜，用转子-定子均质机（8000rPm）处理3分钟，粘性强的可加少量矿物油稀释后搅拌。

均质后通过目视或显微镜确认均匀性：固体无颗粒，液体无分层，半固体无块状物，确保取样代表性。

若均质后仍有不均，需调整方法（如延长超声时间），直至样品均一。

溶解性样品的溶剂选择与稀释

溶剂需兼容实验系统、样品成分与测试方法：水基样品选去离子水或生理盐水，脂溶性选矿物油或≤10% DMSO（避免细胞毒性）。

稀释时先加少量溶剂溶解（如1g固体加2mL溶剂超声），再补加剩余溶剂定容，搅拌至均一。

稀释后检查均一性：无沉淀或悬浮物，用浊度仪确认；若有沉淀，调整溶剂比例或更换溶剂。

用分光光度法或HPLC验证浓度准确性，偏差≤5%，避免浓度误差影响结果。

难溶性样品的分散与助溶策略

难溶样品（如纳米颗粒）用分散法制备混悬液，选惰性介质（矿物油或含0.1%吐温80的生理盐水），吐温80降低表面张力防团聚。

用探头式超声仪（100W）处理10分钟，间歇性搅拌；检测粒径D90≤10μm，避免物理刺激皮肤。

静置24小时观察沉淀，若沉淀≤5%视为稳定；否则加羧甲基纤维素钠增稠，确保测试中不沉淀。

验证活性成分保留率≥80%，避免分散过程中成分流失。

挥发性样品的稳定性控制

挥发性样品（如乙醇、精油）需在4℃冰浴或冷藏室内处理，缩短暴露时间，避免成分蒸发。

用螺口瓶快速定容，瓶口缠Parafilm膜密封；存储于-20℃冷冻柜，降低挥发速率。

处理前后用GC测浓度，确保损失率≤5%；若超过10%，需降低处理温度或增加密封步骤。

操作时用低风速通风橱，保护操作人员同时减少成分扩散。

生物源性样品的灭活与净化

生物源性样品（如动物胶原蛋白、植物提取物）需灭活：耐热样品121℃高压灭菌15分钟，不耐热用紫外线（254nm，30分钟）或75%乙醇浸泡。

净化用0.22μm滤膜过滤（去微生物），或离心（5000rPm，10分钟）去沉淀杂质；含蛋白质的用蛋白酶K消化后离心去除。

验证灭活效果：微生物培养无菌落，PCR检测无病毒核酸；检测活性成分保留率≥80%。

处理后样品无菌存储，避免再次污染，确保测试不受微生物干扰。

样品浓度梯度的确定与制备

根据使用浓度或预实验结果确定最高浓度（无明显刺激性），再制备3-5个梯度（如10%→5%→2.5%）。

采用倍比稀释法，用同一批次溶剂，避免差异；稀释后搅拌均匀，取上、中、下三层测浓度，确保一致。

用分光光度法验证浓度准确性，偏差≤5%；若偏差大，重新稀释并验证。

梯度需覆盖无反应到明显反应的范围，确保能评估剂量-反应关系。

空白对照与阳性对照的同步处理

空白对照用与样品相同的溶剂，同步处理（如稀释、存储），无样品；阳性对照选DNCB或PPD，浓度按测试方法调整（如LLNA用0.1%-1.0%）。

对照与样品在同一时间、环境下处理，确保条件一致；测试后空白对照需无致敏反应（SI<1.5），阳性对照需SI≥3，否则结果无效。

同步处理避免对照与样品条件差异，确保实验系统有效。

若对照无效，需重新处理样品并重复测试，直至对照符合要求。

处理后样品的标识与存储

标识需含样品名称、批号、浓度、处理日期、操作人员与测试方法，用防水耐低温标签贴于容器。

存储条件：水基样品4℃冷藏，脂溶性-20℃冷冻，挥发性-80℃超低温；光照敏感用棕色瓶。

存储期限按稳定性数据设定：液体1周，固体1个月；过期样品销毁并记录。

建立存储台账，记录位置、取出时间与剩余量，定期检查样品状态（如泄漏变色需重新处理）。

交叉污染的防控措施

人员戴一次性丁腈手套、口罩与防护服，处理不同样品前更换手套并消毒；设备用去离子水冲洗后乙醇擦拭，避免残留。

用一次性容器或清洁玻璃容器（玻璃容器需重铬酸钾洗液浸泡后冲洗）；划分清洁区、处理区与存储区，物理分隔避免污染。

定期做空白试验：用清洁溶剂模拟处理过程，检测是否有样品残留；若有残留，加强设备清洁频率。

交叉污染防控贯穿全过程，确保样品间无混淆，结果可靠。