医疗检测

化妆品固体粉末类产品（如散粉、粉饼、矿物眼影等）的安全评估中，皮肤致敏测试是核心指标之一。三方检测作为独立、公正的第三方机构开展的测试，旨在为企业、监管部门提供客观的致敏性数据。与液体、膏霜类产品不同，固体粉末的形态（飞扬性、颗粒大小、分散性）会直接影响皮肤接触效率与试验结果，因此其皮肤致敏测试需更针对性的方法设计与前处理流程。

化妆品固体粉末类产品的皮肤致敏风险特性

固体粉末的物理特性是其致敏风险的核心来源。首先是颗粒大小：粒径≤10μm的粉末易吸附于皮肤角质层表面，甚至通过毛囊、皮脂腺进入表皮深层，延长致敏成分与皮肤细胞的接触时间；而大颗粒（＞50μm）易因重力脱落，接触效率低。其次是飞扬性：散粉、蜜粉等易飞扬的产品，可能在使用中意外接触眼周、颈部等敏感区域，增加致敏概率。

此外，粉末的溶解度也很关键——水溶性粉末会在皮肤汗液中溶解，释放潜在致敏成分；脂溶性粉末则与皮肤表面油脂结合，延缓成分释放，可能引发迟发性致敏。

另一个风险点是“物理刺激与致敏的混淆”：部分磨砂粉的棱角会造成皮肤微小擦伤，引发红肿、瘙痒等类似致敏的症状，需通过试验设计排除这种干扰。

三方检测中皮肤致敏测试的法规依据

皮肤致敏测试需严格遵循国际与国内法规。中国《化妆品安全技术规范（2015版）》明确将“皮肤致敏试验”列为必测项目，推荐方法包括局部淋巴结试验（LLNA）、豚鼠最大化试验（GPMT）及OECD认可的替代方法（如OECD 442A：体外皮肤致敏试验——细胞介导的免疫反应）。欧盟CLP法规要求，化妆品原料及成品需通过皮肤致敏测试评估“严重皮肤刺激”等 hazard类别，其中固体粉末需按OECD 429指南（LLNA）进行前处理。

法规对固体粉末的“接触有效性”有明确要求——若粉末无法直接与皮肤或试验系统充分接触，需通过悬浮液、分散液等形式优化，确保致敏成分的暴露量符合试验设计。

皮肤致敏测试的核心原理与方法分类

皮肤致敏的本质是“免疫介导的二次反应”，试验需模拟“致敏阶段（首次接触）”与“激发阶段（再次接触）”。传统动物试验中，LLNA是最常用的方法：将受试物（固体粉末需制成悬浮液）涂抹于小鼠耳朵，通过检测耳淋巴结的细胞增殖（以3H-胸腺嘧啶掺入法测定）计算刺激指数（SI），SI≥3则判定为致敏阳性。

替代方法（体外试验）更符合“3R”原则，如OECD 442E：使用重建人体表皮模型（如EPiDerm™）评估受试物的细胞毒性与炎症反应——固体粉末需分散于模型表面的培养基中，通过检测乳酸脱氢酶（LDH）释放（细胞毒性）、IL-1α（炎症因子）表达水平判断致敏性。

对于固体粉末，替代方法的优势在于可避免动物试验中“粉末飞扬导致的呼吸道暴露”干扰，更精准模拟人体皮肤接触场景。

固体粉末类产品的前处理要求

前处理是固体粉末测试的关键环节，直接影响结果准确性。首先是分散介质的选择：需优先选用与皮肤生理环境兼容的介质（如生理盐水、矿物油），避免介质本身引发刺激。例如，水溶性粉末用生理盐水悬浮，脂溶性粉末用矿物油分散；若粉末不溶于常见介质，需采用“研磨+超声”组合方式提高分散性。

其次是颗粒大小均一化：需通过激光粒度仪测定粉末的粒径分布（D10、D50、D90），确保受试物颗粒≤10μm（LLNA要求）或符合替代试验的模型接触要求。若颗粒过大，需用匀浆机研磨，但需避免高温导致成分分解。

最后是悬浮液稳定性：需通过磁力搅拌器或超声处理保持悬浮液均一，避免试验过程中粉末沉淀。部分机构会添加少量羧甲基纤维素钠（增稠剂）提高稳定性，但需提前验证增稠剂对试验结果无干扰。

三方检测中的试验设计要点

试验设计需针对固体粉末的特性优化。一是剂量选择：需以“有效暴露量”为核心，而非单纯按重量计算。例如，LLNA中，固体粉末的剂量通常设为10%、25%、50%（w/v）悬浮液，需通过预试验确定无明显皮肤刺激的最高剂量（MND），避免刺激导致假阳性。

二是对照组设置：需包含空白对照（仅用分散介质）、溶剂对照（分散介质+溶剂）及阳性对照（如DNCB，已知致敏物），以排除分散介质、溶剂的干扰，并验证试验系统的有效性。

三是接触方式：对于易飞扬的粉末，需采用“封闭接触”设计——如在小鼠耳朵上覆盖透气胶带，或在重建皮肤模型上覆盖多孔膜，确保粉末与皮肤充分接触，同时避免飞扬污染。

皮肤致敏测试的结果评价标准

结果评价需结合“法规要求”与“固体粉末特性”。对于LLNA，主要看刺激指数（SI）：若SI≥3且剂量-反应关系明显，判定为致敏阳性；若SI≥3但无剂量-反应，需重复试验确认。对于替代方法，如重建皮肤模型试验，需同时满足“细胞毒性≤50%”（确保细胞存活以产生免疫反应）与“IL-1α表达≥2倍空白对照”，才判定为致敏阳性。

需特别注意排除“物理刺激假阳性”：若粉末的棱角或摩擦导致皮肤红肿，需通过组织病理学检查（如小鼠耳皮肤的表皮厚度、炎性细胞浸润）区分——物理刺激仅引发表皮损伤，而致敏会导致真皮层淋巴细胞浸润。

三方检测机构的资质与能力要求

选择三方检测机构时，需重点核查其“固体粉末测试能力”。首先是资质：需具备CNAS认可（认可范围包含“化妆品皮肤致敏试验”与“固体粉末前处理”）及CMA资质（用于中国国内化妆品注册/备案）。其次是设备：需配备激光粒度仪、匀浆机、高速离心机等前处理设备，以及LLNA所需的液体闪烁计数器或替代方法所需的酶标仪。

此外，机构的“经验积累”也很重要——需优先选择有100+例固体粉末测试经验的机构，其技术人员更熟悉粉末的前处理技巧（如悬浮液稳定性控制）与结果偏差修正（如排除物理刺激假阳性）。