医疗检测

化妆品的安全性评价中，急性全身毒性测试（经皮途径）是评估产品经皮肤接触后可能引起全身毒性的关键环节。第三方检测机构作为独立、客观的评估方，其实验操作的规范性直接影响结果的可靠性与法规符合性。本文结合《化妆品安全技术规范》（2022版）及GLP（良好实验室规范）要求，详细梳理经皮途径急性全身毒性测试的实验要求，为行业提供实操参考。

实验前的法规遵循与方案设计

第三方机构开展化妆品经皮急性全身毒性测试时，首先需严格遵循现行法规要求，核心依据为《化妆品安全技术规范》（2022版）中“急性经皮毒性试验”章节，同时需符合GLP对实验方案、数据记录的要求。实验前需制定完整的实验方案，内容包括试验目的、受试物信息、动物选择、染毒方法、观察指标、结果判定标准等，方案需经过机构内部的科学委员会审查，确保方法的合理性与可行性。

此外，动物实验伦理审查是必备环节。第三方机构需成立动物伦理委员会，评估实验的必要性、动物使用的合理性（如是否使用最少数量的动物获得可靠结果），以及动物福利保障措施（如避免不必要的疼痛、提供适宜的饲养环境），审查通过后方可开展实验。

受试物的处理与剂量设计要求

受试物的处理需贴合实际使用场景：若化妆品为成品（如面霜、乳液），通常以原样进行测试；若为粉末或易挥发产品，需考虑其在使用中的状态（如加水稀释后的膏状），但需说明稀释溶剂的安全性（如去离子水或无刺激性溶剂）。受试物需具备均一性，实验前需通过搅拌、超声等方式确保成分均匀，对于混悬液需在染毒前摇匀。

剂量设计需符合法规要求：经皮途径常用“极限剂量法”，即当受试物预计毒性较低时，选择2000mg/kg体重作为最高剂量（这是《化妆品安全技术规范》中规定的经皮急性毒性极限剂量）。若极限剂量下出现死亡或严重毒性，需采用剂量递增法（如设置3-5个剂量组，每组至少10只动物，雌雄各半），以计算半数致死量（LD50）。受试物的剂量需按动物体重精确计算，确保每只动物的染毒量准确。

受试物的稳定性是关键：实验期间（包括染毒前的存储、染毒中的接触阶段），受试物需保持物理化学性质稳定。第三方机构需对受试物进行稳定性测试，如在实验温度（通常25℃±2℃）下放置24小时后，检查其外观、PH值、有效成分含量是否变化，若有不稳定情况需调整实验条件（如冷藏存储）或更换受试物。

实验动物的选择与饲养管理

动物种属选择以“相关性”为核心：大鼠是经皮急性毒性测试的首选动物（如SD大鼠或Wistar大鼠），因其一氧化碳皮肤结构（如表皮厚度、毛发分布）与人类接近，且对经皮吸收的化学物质反应稳定，同时具有繁殖快、易饲养、成本低的优势。部分情况下也可选用豚鼠，但大鼠的使用更普遍。

动物的基本要求：年龄为成年大鼠（通常6-8周龄），体重范围需符合标准（如SD大鼠180-220g），雌雄各半（以评估性别差异）。动物需来自具有资质的实验动物供应商，提供动物质量合格证（如SPF级），确保无潜在病原体感染。

饲养管理需符合GLP要求：动物房温度控制在20℃-26℃，相对湿度40%-70%，光照周期为12小时明/12小时暗，通风次数至少10次/小时。饲料需为实验动物专用全价饲料（符合GB 14924.3要求），饮水为无菌去离子水，自由摄食饮水。动物需经过至少3天的适应期，以熟悉环境、恢复运输中的应激，适应期内需每天观察动物状态，排除健康异常个体（如精神萎靡、体重下降）。

经皮染毒操作的规范流程

皮肤准备是染毒的前提：实验前1天，需对大鼠背部进行去毛处理，方法为剪毛（用动物专用剪毛器）或剃毛（用电动剃毛器），禁止使用脱毛膏（避免化学刺激损伤皮肤）。去毛范围需占体表面积的10%左右（如大鼠背部3cm×3cm区域），确保皮肤完整无破损（若有抓伤或溃疡需剔除该动物）。去毛后需观察24小时，确认皮肤无红肿、破损后方可染毒。

染毒操作需严格标准化：将受试物均匀涂敷在去毛区皮肤表面，厚度约1mm（确保覆盖整个去毛区），然后用无刺激性纱布（或医用棉花）覆盖，再用透气性胶带或弹性绷带固定，避免动物舔食受试物。染毒后需将动物单独饲养（或使用防舔食项圈），确保接触时间为24小时（法规规定的经皮染毒标准接触时间）。

染毒后的清洗需温和：24小时接触结束后，用温水（37℃±2℃）或无刺激性溶剂（如生理盐水）轻轻冲洗去毛区，去除残留受试物，避免用力擦拭损伤皮肤。清洗后需用干毛巾吸干皮肤表面水分，观察皮肤是否有红肿、溃烂等刺激反应，并记录。

染毒后的观察与指标记录

观察周期与频率：急性经皮毒性测试需观察14天（从染毒当天开始计算），前7天需每天观察2次（上午、下午各1次），后7天每天观察1次。观察内容包括：临床症状（如活动量减少、蜷缩、震颤、抽搐、呼吸困难）、饮食饮水情况（如饲料消耗量、饮水量下降）、体重变化（染毒前、染毒后第3天、第7天、第14天测量，计算体重增长率）、皮肤反应（去毛区红肿、水疱、溃烂）、排泄情况（如腹泻、尿色异常）。

死亡与濒死动物的处理：若动物出现濒死状态（如无法站立、呼吸微弱、昏迷），需及时安乐死（采用二氧化碳窒息法或颈椎脱臼法），避免不必要的痛苦。所有死亡动物需立即进行剖检，观察主要脏器（心、肝、脾、肺、肾、胃肠道）的大体病变（如肝脏肿大、脾脏出血、肾脏变性），并记录病变部位与程度。必要时需取脏器组织进行组织病理学检查（如HE染色），以明确毒性靶器官。

体重与症状的量化记录：体重需用精确到0.1g的电子天平测量，症状需采用标准化术语（如按照《实验动物临床症状观察指南》）记录，避免主观描述（如“精神不好”需改为“活动量减少，仅在刺激时移动”）。第三方机构需使用电子数据系统（如LIMS系统）记录所有观察数据，确保可追溯性。

结果判定的法规依据

结果判定需严格对照《化妆品安全技术规范》（2022版）中的标准：若采用极限剂量法（2000mg/kg体重），实验结束后若动物无死亡，且无严重临床症状（如抽搐、昏迷、脏器严重病变），则判定受试物“急性经皮毒性低”，LD50>2000mg/kg体重；若出现死亡或严重毒性，需通过剂量递增法计算LD50，并根据LD50值进行毒性分级（如LD50≤50mg/kg为极毒，50-300mg/kg为剧毒，300-2000mg/kg为中等毒，>2000mg/kg为低毒）。

性别差异的考虑：若雌雄动物的毒性反应存在显著差异（如雌性动物死亡率更高），需在报告中说明，并分析可能的原因（如激素水平影响皮肤吸收）。若差异不显著，可合并计算结果。

第三方机构的质量控制要点

人员资质与培训：实验人员需具备相关专业背景（如预防医学、动物医学、化妆品科学），并经过严格培训，包括动物实验操作（如剪毛、染毒、安乐死）、法规解读（如《化妆品安全技术规范》《GLP规范》）、数据记录与管理。培训后需通过考核（如操作技能测试、法规知识考试），方可上岗。

设施与设备的校准：动物房需通过实验动物使用许可证验收，设施条件符合GLP要求（如独立的饲养区、操作区、剖检区）。实验设备需定期校准：电子天平（每月1次）、温湿度计（每周1次）、动物秤（每月1次）、离心机（每季度1次）等，校准记录需保存至少5年。

数据的完整性与可追溯性：所有实验数据（包括受试物信息、动物信息、操作记录、观察结果、剖检报告）需及时录入LIMS系统，确保数据不可篡改。原始记录需手写或电子签名，记录日期与时间。实验报告需包含所有原始数据的摘要，以及结果分析的依据，确保报告的真实性与准确性。

审计与验证：第三方机构需接受监管部门（如国家药监局化妆品监管司）或客户的审计，审计内容包括实验方案的合规性、数据的真实性、设施设备的符合性。若发现问题需及时整改，并重新验证实验结果。

此外，机构需参加能力验证（如中国合格评定国家认可委员会（CNAS）组织的化妆品毒性测试能力验证），以证明其测试能力的稳定性。