医疗检测

化妆品精华液因高浓度活性成分（如香料、防腐剂、植物提取物）易引发皮肤致敏风险，三方检测中的皮肤致敏测试是保障产品安全的核心环节。本文聚焦该测试的关键指标，解析其科学逻辑与实践意义，为行业理解致敏测试的核心要点提供专业参考。

皮肤致敏性的核心终点：诱导与激发的双重评价

皮肤致敏是“诱导-激发”的两步免疫过程：诱导期时，精华液中的半抗原透过皮肤屏障，与表皮角蛋白、血清白蛋白等蛋白质结合形成完全抗原，被朗格汉斯细胞（抗原呈递细胞）摄取并迁移至淋巴结，呈递给T淋巴细胞；激发期则是再次接触相同抗原时，活化的T细胞释放炎症因子，引发延迟性超敏反应。因此，致敏测试需同时评价“诱导能力”与“激发反应”两大核心终点。

诱导期的关键指标是“抗原提呈效率”，通过检测表皮中CD1a阳性朗格汉斯细胞的迁移比例反映——迁移率越高，说明半抗原激活抗原呈递细胞的能力越强。例如，某含甲醛释放体的精华液，可使朗格汉斯细胞迁移率从基线的10%升至45%，提示强诱导能力。

激发期的核心终点是“延迟性反应发生率”，即受试者再次接触后24-72小时内出现红斑、丘疹、水疱等症状的比例。依据《化妆品安全技术规范》，该比例≥1%且反应强度≥2级（红斑明显伴轻度水肿）时，需判定为阳性致敏反应。

反应强度评分也是核心终点之一。红斑/水肿按0-4级分级（0级无反应，4级严重水疱），评分≥2级且持续超过48小时的反应，需纳入致敏风险评估。

半抗原蛋白结合能力：致敏性的分子基础指标

精华液中的致敏原多为半抗原（小分子化合物），其本身无免疫原性，需与皮肤蛋白质结合形成完全抗原才能触发免疫反应。因此，半抗原与蛋白的结合能力是致敏性的分子基础，直接决定了致敏风险的高低。

该指标通过“体外蛋白结合试验”检测：将半抗原与人类皮肤角蛋白或牛血清白蛋白共同孵育，利用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）定量结合物浓度，计算“结合率”（结合的半抗原量/总半抗原量）与“结合常数”（反映结合亲和力）。结合率≥10%或结合常数≥1×10^4 L/mol的半抗原，需重点标注致敏风险。

例如，香料成分“香豆素”与角蛋白的结合率达25%，结合常数为5×10^4 L/mol，因此常被列为高致敏原；而植物提取物中的“槲皮素”结合率仅3%，致敏风险极低。

局部淋巴结 assay（LLNA）的关键参数：体外致敏性的量化分级

局部淋巴结 assay（LLNA）是OECD推荐的体外致敏性测试方法，通过检测小鼠耳后淋巴结T细胞的增殖情况，量化精华液的致敏潜力。其关键参数直接关联致敏强度的分级，是三方检测中常用的体外评价指标。

第一个参数是“增殖指数（SI）”：计算处理组淋巴结细胞的放射性胸腺嘧啶（3H-TdR）掺入量与对照组的比值。根据OECD 429指南，SI≥3时判定为“致敏性”，SI在2-3之间需补充试验验证。

第二个参数是“EC3值”：即诱导SI达到3所需的半抗原浓度（%w/v）。EC3值越小，致敏性越强——EC3<0.1%为极强致敏原，0.1%-1%为强致敏原，1%-10%为中等致敏原，>10%为弱致敏原。例如，防腐剂“甲基异噻唑啉酮”的EC3值为0.05%，属于极强致敏原。

此外，“淋巴结重量/体重比”是辅助参数：处理组比值较对照组增加超过20%，可作为SI阳性的补充证据，减少假阴性结果。

皮肤刺激性与致敏性的区分指标：避免误判的核心要点

精华液的皮肤反应常混淆“刺激性”（非免疫性炎症）与“致敏性”（免疫性炎症），需通过3类指标明确区分，避免误判产品风险。

一是“反应出现时间”：刺激性反应多在接触后1-24小时内出现（如酒精引发的即时红斑），致敏性反应则在24-72小时后出现（延迟性超敏反应）。例如，某含水杨酸的精华液，接触后2小时出现红斑（刺激性）；而含“丙二醇”的精华液，48小时后出现丘疹（致敏性）。

二是“反应持续时间”：刺激性反应去除刺激物后1-3天消退，致敏性反应可持续5-7天甚至更久。若红斑持续超过72小时且无缓解，需高度怀疑致敏性。

三是“反应的可逆性与重复性”：刺激性反应消退后无后遗症，致敏性反应可能遗留色素沉着；且致敏性反应具有“再次接触加重”的特点——第二次接触相同成分时，反应强度明显高于首次。

人体重复暴露斑贴试验的评价要点：真实场景的风险验证

人体重复暴露斑贴试验是验证精华液致敏性的“金标准”，模拟日常使用场景（每天涂抹1-2次，持续2-4周），评价长期接触的真实致敏风险。其关键指标聚焦“真实暴露下的反应特征”。

首先是“试验设计规范性”：按《化妆品人体安全性试验指导原则》，需招募100-200名健康志愿者（无过敏史），将精华液涂抹于背部/前臂屈侧（2cm×2cm），每天1次，持续21天；试验结束后随访2周，观察延迟性反应。

其次是“阳性反应率”：试验期间或随访期出现致敏性反应（红斑、丘疹伴瘙痒）的志愿者比例。根据国际接触性皮炎研究组（ICDRG）标准，阳性反应率≥2%的产品，需判定为“潜在致敏性”。

最后是“累积反应率”：统计21天内逐渐出现的阳性反应比例。例如，某植物精华液的累积反应率第7天为0%，第14天为1%，第21天为3%，需判定为阳性。

细胞因子生物标志物：体外致敏测试的新型量化指标

随着体外替代试验发展，细胞因子生物标志物成为致敏测试的新型关键指标，通过检测免疫细胞分泌的炎症因子，量化致敏过程的免疫激活程度，弥补传统方法的局限性。

常用生物标志物包括：IL-1β（介导炎症起始）、TNF-α（促进朗格汉斯细胞迁移）、IL-6（促进T细胞增殖）、IL-12（诱导Th1型免疫反应）。这些细胞因子的浓度变化直接反映致敏进程——IL-1β升高≥2倍或TNF-α升高≥3倍，提示潜在致敏性。

检测采用“重建人体表皮模型试验”：将精华液作用于EPiDerm™等模型，培养24-48小时后，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中的细胞因子浓度。例如，某含“薄荷醇”的精华液，使模型中IL-1β浓度升高4倍，后续人体试验验证其阳性反应率为3%，说明生物标志物具有良好预测价值。

此类指标的优势在于“早期预警”——可在产品上市前快速筛选致敏原，减少人体试验的风险与成本，是三方检测的重要补充工具。