环境检测

屠宰场废水富含有机物、悬浮物及病原微生物，粪大肠菌群作为指示水体受粪便污染的关键指标，其含量直接反映废水卫生安全性。第三方检测因独立性、专业性成为验证屠宰场废水达标排放的重要手段，本文围绕屠宰场废水粪大肠菌群检测的标准依据、样品处理及具体方法展开，为从业者提供实操指导。

粪大肠菌群检测的标准依据

屠宰场废水粪大肠菌群检测需遵循三类标准：国家污染物排放标准如《城镇污水处理厂污染物排放标准》（GB 18918-2002），规定一级A排放标准为10000个/100mL；检测方法标准如《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》（GB/T 5750.12-2006），明确多管发酵法、滤膜法等操作细节；行业评价标准如《畜禽场环境质量评价准则》（NY/T 396-2021），针对畜禽屠宰废水的粪大肠菌群限值提出要求。部分地区还会出台地方标准（如北京DB11/307-2013），需结合项目所在地规则执行。

屠宰场废水粪大肠菌群检测样品采集要求

样品采集需反映废水真实状况，优先选择总排放口出水；若评估处理工艺效果，需补充采集格栅、气浮池、生化池等单元的进出口水样。采集工具用121℃高压灭菌20分钟的无菌容器，口部用铝箔密封，避免杂菌进入。

采集量需≥500mL，满足平行样和复检需求。流量稳定时用瞬时采样（直接取一次出水）；流量波动大时用混合采样（按时间/流量比例取3-5次水样混合）。操作人员需戴无菌手套，用75%乙醇消毒手部，采集后立即标注样品编号、日期、来源等信息，防止混淆。

采集过程中，容器外壁不得接触废水，避免交叉污染。若水样含可见杂物（如肉屑），需先轻轻摇匀再采集，确保样品均匀。

屠宰场废水样品的保存与运输规范

采集后样品需立即置于4℃±2℃冷藏环境，抑制粪大肠菌群繁殖——温度过高会导致细菌大量繁殖，过低则可能损伤细胞。保存时间最长不超过24小时，超期需重新采样。

运输时用保温性能良好的冷藏箱，内放冰袋或蓝冰维持温度，避免样品冻结（结冰会破坏细菌细胞结构，影响检测结果）。样品容器需固定，防止震荡溢出；箱外标注“微生物样品”“冷藏运输”等警示，提醒运输人员轻拿轻放。

屠宰场废水样品的前处理方法

屠宰场废水含大量悬浮物（肉屑、油脂、毛发），会吸附粪大肠菌群，导致检测时细菌无法与培养基充分接触。前处理的核心是去除大颗粒悬浮物，同时保留粪大肠菌群的完整性。

含大颗粒悬浮物（如可见肉屑、毛发）的水样，用无菌纱布过滤（纱布需经121℃灭菌20分钟）；含微小悬浮物的水样，用均质器以8000-10000r/min的速度均质1-2分钟，使悬浮物分散均匀。

若废水中油脂含量高（水面有明显油层），可将水样置于4℃冰箱冷藏30分钟，待油脂浮起后，用无菌吸管吸取下层水相（约占水样体积的2/3）——避免吸取油层或底部沉淀物，防止干扰检测。

粪大肠菌群检测的多管发酵法操作细节

多管发酵法是粪大肠菌群检测的经典方法，基于其在44.5℃下发酵乳糖产酸产气的特性，分三步进行：

第一步是水样稀释：根据预计浓度，用无菌生理盐水做10倍梯度稀释（如1:10、1:100、1:1000），选择3-5个稀释度。第二步是初发酵试验：取各稀释度水样10mL、1mL、0.1mL，分别接种到乳糖胆盐发酵管（含溴甲酚紫指示剂）中，每个稀释度做3管重复，44.5℃±0.5℃培养24小时±2小时——若发酵管变黄（产酸）或倒置小管有气体（产气），即为初发酵阳性。

第三步是平板分离与复发酵：将初发酵阳性的发酵管内容物接种到伊红美蓝（EMB）琼脂平板，37℃培养18-24小时，典型菌落为紫黑色带金属光泽或淡紫色；挑取2-3个典型菌落接种乳糖发酵管，再次44.5℃培养24小时，若产酸产气则判定为粪大肠菌群阳性。最后根据阳性管数查MPN（最大可能数）表，计算浓度（单位：MPN/100mL）。

粪大肠菌群检测的滤膜法操作要点

滤膜法适用于低浓度粪大肠菌群水样，原理是用滤膜截留细菌，再通过选择性培养基培养计数。操作步骤如下：

首先准备MFC（粪大肠菌群琼脂）培养基——该培养基含乳糖、玫瑰红钠和胆盐，能抑制杂菌生长，粪大肠菌群发酵乳糖会产生蓝色/蓝绿色菌落。安装0.45μm无菌滤膜到滤器上，加入100mL水样（浓度过高需稀释），用负压缓慢抽滤，使水样通过滤膜（截留细菌）。

抽滤完成后，用无菌镊子将滤膜取出，菌面朝上贴在MFC平板上（避免气泡），44.5℃培养24小时±2小时。培养后计数蓝色/蓝绿色、直径0.5-2mm的典型菌落——选择菌落数在20-200之间的平板，结果乘以稀释倍数，即为粪大肠菌群浓度（单位：CFU/100mL）。

粪大肠菌群检测的酶底物法快速检测流程

酶底物法是快速检测技术，利用粪大肠菌群特有的两种酶：β-半乳糖苷酶（分解ONPG产生黄色物质）和β-葡萄糖醛酸苷酶（分解MUG产生荧光）。操作简便，无需稀释和分离：

取100mL水样（或稀释后的水样）加入无菌反应瓶，加入ONPG和MUG试剂（需在有效期内，冷藏保存），摇匀后密封，44.5℃±0.5℃培养24小时±2小时。

结果判断：若反应瓶内溶液变为黄色，说明存在大肠菌群；若同时在365nm紫外灯下观察到荧光，则判定为粪大肠菌群阳性。根据阳性反应瓶数量查MPN表，得出浓度（单位：MPN/100mL）。

该方法的优势是检测时间短、自动化程度高，适合批量样品；需注意试剂需冷藏保存，避免高温失效。

第三方检测机构的质量控制措施

第三方检测需保证结果的准确性和可靠性，需执行严格的质量控制：

1、空白试验：每次检测同步做无菌水空白——取100mL无菌生理盐水按相同方法检测，若空白出现阳性，说明实验环境、试剂或容器被污染，需重新检测。

2、平行样检测：每批样品做10%的平行样（至少1个），平行样结果的相对偏差需≤15%，否则需重新检测。

3、质控样验证：定期使用有证标准物质（如粪大肠菌群标准菌株）进行检测，验证方法的准确性——若质控样结果偏离标准值，需校准设备或调整操作流程。

此外，检测人员需具备微生物检测相关资质，定期参加能力验证或实验室间比对；实验环境需保持无菌，超净工作台定期用紫外线消毒，培养箱、高压灭菌锅等设备定期校准。