医疗检测

三方检测中，皮肤致敏测试的剂量设置直接影响结果准确性。本文解析其科学依据与方法，为行业实践提供参考。

皮肤致敏测试的剂量设置核心原则

需平衡“有效暴露”与“无毒性”——剂量过高易引发皮肤损伤导致假阳性，过低则漏检致敏性导致假阴性。

科学性要求基于受试物理化性质、使用场景，如护肤品需参考日常使用浓度，工业化学品需考虑职业暴露量。

可重复性确保不同实验室结果可比，需明确操作指南，避免人员差异导致剂量偏差。

法规符合性是前提，需遵循OECD、中国《化妆品安全技术规范》等要求，确保结果被监管认可。

受试物特性对剂量的影响

溶解度决定最大剂量——水溶性物质用生理盐水，脂溶性用丙酮（浓度≤50%），避免溶剂自身致敏。

挥发性物质需补偿损失：如香精易挥发，需增加涂抹频率或封闭贴敷维持有效剂量。

分子量影响穿透性：高分子物质（如>500Da）皮肤穿透弱，需提高剂量或延长暴露时间。

稳定性需控制：易降解物质（如维生素C）需现配现用，或提高初始浓度补偿降解损失。

毒理学基础：剂量-反应关系

致敏存在“阈值”——低于阈值无反应，高于则可能致敏。需以无观察到不良效应剂量（NOAEL）为参考，如预试验中50%浓度无刺激，则作为候选剂量。

诱导期与激发期剂量有差异：如豚鼠最大化试验中，诱导期用高剂量致敏免疫系统，激发期用低剂量观察反应。

长期使用产品需模拟累积剂量：如护肤品每日2次，需参考多次涂抹的总剂量而非单次最高剂量。

暴露频率影响剂量，多次涂抹的总剂量需纳入考量，避免漏检长期暴露的致敏潜力。

预试验对剂量确定的关键作用

预试验需测刺激性、溶解度、稳定性：刺激性预试用豚鼠测红斑水肿，确定无刺激剂量；溶解度预试找最大可溶浓度；稳定性预试模拟测试条件测浓度变化。

例如，通过OECD 404导则测刺激性，50%浓度无反应则作为候选剂量；若受试物在水中最大溶20%，则最高剂量不超20%。

预试筛溶剂：如受试物不溶于水，需选刺激性小且溶解度足够的橄榄油（如溶30%且无刺激）。

挥发性受试物预试中发现1小时挥发50%，则正式测试需增加涂抹频率或封闭贴敷。

法规与测试方法的剂量约束

法规提供明确框架：OECD 406要求豚鼠试验诱导期用最大无刺激剂量，激发期用1/2剂量；中国《化妆品安全技术规范》要求LLNA设3-4个剂量梯度。

不同测试方法剂量不同：豚鼠试验用浓度（%），LLNA用重量/面积（mg/cm²）；人体试验（HRIPT）需模拟实际使用浓度（如面霜5%）。

体外测试（如KeratinoSens™）需基于细胞毒性：选IC50的1/2剂量，避免细胞毒性干扰结果。

暴露场景需匹配：工业化学品参考职业接触量，化妆品参考日常使用场景的剂量。

对照样本的剂量设计要点

阳性对照选已知致敏剂：如DNCB（强致敏）诱导期用0.1-0.5%，激发期用0.01-0.05%；肉桂醛（中等致敏）LLNA用5-25mg/cm²。

阴性对照与受试物形式一致：如受试物是30%乙醇溶液，阴性对照为纯乙醇，剂量相同。

对照剂量需稳定：阳性对照剂量固定，若某次测试无反应，说明测试系统无效，结果需作废。

混合物阴性对照选非致敏成分：如混合物含A（致敏）与B（非致敏），阴性对照为B的相同浓度。

特殊受试物的剂量处理

混合物按组分致敏性调整：如A（20%致敏）与B（80%非致敏），总剂量需确保A达致敏阈值（如混合物0.5%对应A 0.1%）。

纳米材料需考虑比表面积：比表面积大活性高，剂量为常规材料1/10；易团聚需增加剂量确保有效颗粒数。

生物制品按蛋白浓度：如重组蛋白用1mg/ml剂量，避免降解导致剂量不准确。

易挥发混合物需补偿挥发：乙醇挥发快，需增加初始浓度，确保其他组分暴露剂量准确。