医疗检测

随着《化妆品监督管理条例》及其配套法规落地，中国化妆品行业进入“最严监管”阶段，第三方检测作为产品安全验证的关键环节，其皮肤致敏测试的执行标准直接关联合规性。本文聚焦新规下三方检测机构开展皮肤致敏测试的具体要求，拆解技术框架与操作要点。

皮肤致敏测试的法规框架与核心依据

中国化妆品皮肤致敏测试的法规基础是《化妆品监督管理条例》（国务院令第727号），其中第二十一条明确“化妆品注册人、备案人需对质量安全负责”，而皮肤致敏性作为安全性核心指标，需通过科学测试验证。

配套技术规范为《化妆品安全技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），其第四章“毒理学试验方法”中规定了局部淋巴结试验（LLNA）、豚鼠最大化试验（GMPT）、Buehler试验（BT）三种经典方法，是三方检测的核心技术依据。

此外，《化妆品注册备案管理办法》（国家药监局令第35号）要求注册备案时提交“安全性评价资料”，其中皮肤致敏试验报告需由具备资质的第三方检测机构出具，且内容需符合《规范》要求。

2023年发布的《化妆品安全技术规范（2024年版）》征求意见稿中，新增人细胞系活化试验（h-CLAT）、直接肽反应试验（DPRA）等体外方法，虽未正式实施，但已成为行业关注方向，部分机构已提前布局相关能力。

三方检测机构的资质要求

开展皮肤致敏测试的第三方机构需具备中国计量认证（CMA）资质，且认证范围需包含“化妆品毒理学试验”中的“皮肤致敏试验”项目——CMA由省级以上市场监管部门颁发，是报告具法律效力的前提。

建议选择具备中国合格评定国家认可委员会（CNAS）认可的机构，CNAS依据ISO/IEC 17025标准，覆盖方法有效性、人员能力、设备管理等环节，保证结果可靠性。

部分高端品牌或进口化妆品会要求机构符合“良好实验室规范（GLP）”，GLP强调试验可重复性与数据真实性，适用于需提交国家药监局的注册类化妆品测试。

需注意，机构资质需在有效期内，且测试项目在资质范围内，否则报告不被监管认可。

经典皮肤致敏试验的执行标准

《规范》中的三种经典方法是当前主流选择，具体执行要求如下：

1、局部淋巴结试验（LLNA）：通过小鼠耳部淋巴结增殖情况判断致敏性——选6-8周龄雌性CBA/J小鼠，诱导阶段涂抹样品于耳部，检测阶段注射放射性胸腺嘧啶核苷，测量淋巴结放射性强度。刺激指数（SI）≥3为致敏阳性。

2、豚鼠最大化试验（GMPT）：结合Freund完全佐剂（FCA）增强免疫，适用于强致敏原检测——诱导阶段皮内注射样品与FCA混合物，2周后背部涂抹样品激发，观察24、48、72小时皮肤反应（红斑、水肿），按严重程度判定致敏等级。

3、Buehler试验（BT）：又称封闭斑贴试验，适用于弱致敏原——每周1次共3次将样品贴敷豚鼠背部（每次48小时），2周后再次贴敷激发，观察反应，阳性率≥10%为致敏阳性。

方法选择需结合样品性质（原料/成品）、预期用途（如面部/身体化妆品）等因素，机构需与委托方沟通确定。

体外皮肤致敏试验的最新要求

《化妆品安全技术规范（2024年版）》征求意见稿新增的体外方法，符合“3R”（替代、减少、优化）原则，主要用于原料筛查：

1、人细胞系活化试验（h-CLAT）：检测人树突状细胞系（THP-1）表面CD86、CD54标志物表达——细胞培养至对数期，加样品处理24小时，流式细胞仪测标志物相对荧光强度比（RFU），RFU≥1.5为阳性。

2、直接肽反应试验（DPRA）：检测样品与半胱氨酸（Cys）、赖氨酸（Lys）的反应率——样品与肽溶液孵育24小时，高效液相色谱（HPLC）测剩余肽含量，反应率≥60%（Cys）或≥30%（Lys）为阳性。

目前体外方法主要用于原料筛查，成品仍以经典动物试验为主，但法规完善后将逐步成为主流。

测试样品的制备要求

样品制备需严格遵循《规范》，确保代表性与稳定性：

1、成品化妆品：面霜、乳液等保持原状态，过于黏稠可加无致敏稀释剂（如凡士林、石蜡油）稀释，比例需记录报告。

2、化妆品原料：固体研磨成细粉，液体直接使用；不溶原料选合适溶剂（如二甲基亚砜、乙醇）溶解，溶剂需做空白对照，避免干扰结果。

3、样品量：经典动物试验需50-100g（ml），体外试验需20-50g（ml），具体按方法确定。

4、样品保存：阴凉干燥处存放，避免直射；有特殊要求（如冷藏）需提前告知机构。

试验过程的质量控制

为保证结果准确，机构需实施严格质量控制：

1、对照试验：每批次设阳性对照（如2,4-二硝基氯苯）和阴性对照（如凡士林）——阳性需出现预期反应，阴性需无反应，否则试验无效。

2、重复试验：关键数据（如LLNA的SI值、GMPT的皮肤评分）需重复测试，确保一致性。

3、人员培训：试验人员需具毒理学资质，熟悉《规范》流程，定期参加培训考核。

4、设备校准：流式细胞仪、HPLC、放射性测量仪等需定期校准，校准记录留存备查。

测试报告的内容要求

报告是注册备案的核心资料，需包含以下信息：

1、委托方信息：名称、地址、联系人、联系方式。

2、机构信息：名称、CMA/CNAS资质编号、地址、联系方式。

3、样品信息：名称、批号、规格、生产日期、保质期、状态。

4、试验方法：明确采用的方法（如LLNA）、依据标准（如《规范》2015版）。

5、试验结果：原始数据（如SI值、皮肤评分、肽反应率）、判定结论（致敏阳性/阴性）。

6、签字盖章：授权签字人签字，加盖CMA/CNAS印章，注明报告编号与日期。

常见问题与注意事项

1、方法选择：需结合样品类型（原料/成品）、监管要求（注册/备案）等，机构需提供专业建议——如眼部化妆品需更严格方法。

2、样品量不足：若样品量不够，需补充后再试验，否则影响进度。

3、结果解读：致敏阳性不代表产品不能上市，需结合使用方式（如冲洗类风险低）、原料浓度（低于致敏阈值）等综合评价。

4、报告有效期：一般2-3年，若配方或工艺变化，需重新检测。